Блот-анализ ДНК и метод «отпечатков пальцев» ДНК. Основные этапы и применение в медицинской практике
НАВИГАЦИЯ ПО СТРАНИЦЕ
легко понять и запомнить
Блот-анализ ДНК
В настоящее время в геноме человека открыты гены и установлены последовательности, которые отвечают за развитие самых разных генетических заболеваний. Задача метода: найти, есть ли эта последовательность, или нет.
В основе метода – гибридизация между миншенью (последовательность нуклеиновых кислот, отвечающая за болезнь) с зондом (одноцепочечная молекула ДНК, комплиментарная некому гену-мешени и меченная Р³²). При проведении блот – анализа используют одноцепочечную молекулу ДНК, комплиментарную искомой и меченую радиоактивным фосфором.
Этапы постановки блот анализа ДНК:
Экстракция ДНК (выделение из материала).
Разрезание ДНК рестриктазами на фрагменты.
Разделение фрагментов по молекулярной массе путем электрофореза в агарозном геле.
Перенос ДНК на нитроцеллюлозу и денатурация ее щелочью.
Блокирование пустых зон избытком ДНК.
Обработка зондом и образование гибридов мишень-зонд.
Промывка для удаления несвязанного зонда и ауторадиография.
Пример использования метода в диагностике генетических заболеваний: если после ауторадиографии появляется полоска ⇒ зонд связался с мишенью ⇒ человек болен.
Саузерн-блоттинг
Метод «отпечатков пальцев» ДНК
Приминение «метода отпечатков пальцев» ДНК:
Идентификация личности.
В судебной медицине: установление принадлежности биологических материалов.
Комплексной диагностике наследственных заболеваний.
Поисков участков ДНК, отвечающих за развитие патологии.
Установление/исключение отцовства/материнства.
В основе метода – принцип гибридизации на основе комплиментарности. У каждого человека имеется уникальная неповторимая последовательность нуклеотидов ДНК и уникальное расположение сайтов для рестриктаз.
Этапы метода:
Выделение биологического материала.
Действие рестриктаз (получаем фрагменты ДНК различной длины, разделяемых электрофарезом).
К каждому полученному фрагменту засылается зонд (зонд свяжется только с одним из фрагментов).
После ауторадиографии проявляются полоски, характер и расположение которых уникальны для каждого человека (исключение: однояйцевые близнецы).
Метод «отпечатков пальцев» ДНК
