... > Биологическая химия > Полимеразная цепная реакция....

Полимеразная цепная реакция. Клонирование. Основные этапы и применение в медицинской практике

НАВИГАЦИЯ ПО СТРАНИЦЕ

ПЦР Этапы Применение ПЦР Клонирование Этапы клонирования Применение
ПОЛНЫЙ ОТВЕТ
БЕЗ ВОДЫ
Без воды — краткий вариант ответа,
легко понять и запомнить

ПЦР (полимеразная цепная реакция) – способ увеличения количества копий ДНК, находящейся в биологическом материале в минимальных количествах.

Этапы:

  1. денатурация ДНК (Т до 90°С);

  2. добавление специфического праймера и охлаждение ДНК (Т до 55°С) (отжиг);

  3. добавление нуклеотидов (субстратов синтеза) и ДНК-полимеразы (фермента синтеза);

  4. повторение цикла.

Позволяет за короткое время получить множество копий ДНК (порядка 20 млн за 0,5 ч).

Применение ПЦР:

  • диагностика вирусных и бактериальных инфекций (ВИЧ, гепатит, хламидиоз, туберкулез, менингита);

  • генетическая диагностика заболеваний;

  • судебная медицина;

  • изучение генома человека.

Клонирование – получение большого количества молекул, клеток, организмов-потомков одного предка, отдельных генов.

Вектор – природный ген определенного микроорганизма с внедренным в него участком чужеродного гена.

Рестриктазы (рестриктационные эндонуклеазы) – ферменты, узнающие специфическую последовательность нуклеотидов и разрывающие в этом месте молекулу ДНК.

Действуют в области палиндромов ДНК – мест, где последовательность нуклеотидов одной цепи идентична последовательности нуклеотидов другой цепи, прочитанной в обратном порядке. В молекулярной биологии рестриктазы используют для создания генетических векторов (внедрение гена в плазмиду и т.п.).

В качестве векторов применяется:

  • плазмида – небольшая кольцевидная молекула ДНК бактерий, реплицируемая независимо от нуклеоида;

  • бактериофаг лямбда;

  • хромосомы дрожжей;

  • космидные векторы – гибрид фага лямбда и плазмиды.

Этапы клонирования:

  1. получение генетического материала (разрезание рестриктазами вектора и внедряемого гена с образованием палиндромов);

  2. включение гена в векторную молекулу с помощью лигаз и создание рекомбинантной ДНК;

  3. введение рекомбинантной ДНК в клетку хозяина;

  4. отбор трансформированных клеток на селективных средах.

Применение:

  • получение разнообразных вакцин и иммунологических диагностикумов;

  • синтез ряда БАВ: СТГ, инсулин, эритропоэтин, интерфероны, факторы свертывания крови;

  • получение ферментов в промышленности;

  • получение относительно недорогого пищевого белка для животных и т.д.

Netology

Полезные ссылки:

zaka-zaka

Покупай игры выгодно

РЕКЛАМА, ООО «ГЕЙБСТОР» ИНН: 7842136365

zaochnik

Срочная помощь в написании всех видов работ

РЕКЛАМА, ООО «ЗАОЧНИК.КОМ.» ИНН: 7710949967

skyeng

Лучшие из курсов английского в Skyeng

РЕКЛАМА, ОАНО ДПО «СКАЕНГ» ИНН: 9709022748