Серологическая диагностика сифилиса. Трепонемные и нетрепонемные тесты. Клиническое толкование результатов исследований

Серологическая диагностика сифилиса

Серологическими методами выявляются антитела к бледной трепонеме. Эти методы подразделяются на нетрепонемные (скрининговые) и трепонемные (диагностические).

Нетрепонемные тесты делятся на реакцию связывания комплемента (РСК) — реакцию Вассермана с липидными антигенами и флокуляционные реакции: реакция Канна, цитохолевая реакция Закс-Витебского, микрореакция преципитации (МРП), VDRL, тест быстрых плазменных реагинов — RPR, тест определения активных реагинов плазмы — USR, тест с толуидиновым красным и непрогретой сывороткой — TRUST. С помощью этих тестов выявляются IgM и IgG антитела (реагины) к липидам клеточной стенки бледной трепонемы, которые появляются в крови в количестве достаточном для определения этими реакциями примерно через неделю после появления твердого шанкра.

Принцип реакции Вассермана с липидными антигенами: у больного сифилисом кардиолипиновый антиген соединяется с реагинами сыворотки крови, образуя иммунный комплекс, способный адсорбировать и связывать комплемент, а индикация образования этого комплекса (реагины-антиген-комплемент) проводится с помощью гемолитической системы, которая представляет собой оттитрованную смесь эритроцитов барана и гемолитической сыворотки.

У больного сифилисом комплемент связан реагинами и поэтому комплекс «эритроциты барана + гемолитическая сыворотка + комплемент» образоваться не может и эритроциты барана выпадают в осадок (т.е. реакция положительная). У здорового человека комплемент не связан в первой фазе реакции, поэтому при добавлении гемолитической системы свободный комплемент ею связывается и происходит гемолиз эритроцитов барана, при этом степень выраженности гемолиза определяется визуально и оценивается крестами (4+ — полное отсутствие гемолиза, т.е. реакция резкоположительная; 3+ — значительная задержка гемолиза — реакция положительная; 2+ — значительный гемолиз — реакция слабоположительная; ± — незначительная задержка гемолиза, незначительная мутность содержимого пробирки — реакция сомнительная; полный гемолиз — реакция отрицательная. У больных с резкоположительной реакцией (4+) ставится количественный метод Боаса, что достигается ступенчатым разведением сыворотки (1:10, 1:20, 1:40, 1:80 и т.д.). При этом титр реагинов определяется наибольшим разведением сыворотки, в котором регистрируется положительный результат. Знание титра антител имеет существенное значение в диагностике клинических форм сифилитической инфекции. Титр реагиновых антител снижается после адекватной терапии, что в определенной мере позволяет судить об эффективности лечения. Модификация реакции Вассермана на холоде оказалась более чувствительной, чем в классической постановке.

Принцип МРП заключается в том, что при добавлении эмульсии кардиолипинового антигена к плазме или сыворотке крови больного сифилисом образуются хлопья преципитата белого цвета. Результаты реакции оцениваются по количеству выпавшего осадка, величине хлопьев и выражаются в крестах: 4+, 3+, 2+ и отрицательная.

Серологические тесты на наличие антител (реагинов) к кардиолипину могут выявляться и при других физиологических и патологических состояниях и могут давать ложно положительные результаты на сифилис. Поэтому эти реакции называют нетрепонемными, и они служат в качестве первичных скрининговых тестов на сифилис.

Основными причинами ложноположительных нетрепонемных тестов являются: аутоиммунные заболевания (ревматизм, системная красная волчанка, системная склеродермия, узелковый периартериит, криоглобулиновая пурпура, саркоидоз), онкологические заболевания и болезни крови, некоторые вирусные и бактериальные инфекции, малярия, цирроз печени, наркомания, алкоголизм, беременность, эндокринные заболевания (сахарный диабет, аутоиммунный тиреоидит), старческий возраст и др.

Феномен прозоны — появление ложноотрицательных или слабоположительных результатов при наличии избыточного количества антител в неразведенной исследуемой сыворотке (блокировка реакции антиген-антитело), в то время как при разведении исходной сыворотки получаются резко положительные результаты.

Трепонемные (подтверждающие диагноз сифилиса) серологические тесты.

Специфические серологические тесты называются трепонемными, потому что они предполагают применение антигенов трепонемного происхождения. К ним относятся:

• Реакция связывания комплемента (реакция Вассермана) с трепонемным антигеном – РСКт.

• Реакция иммобилизации бледных трепонем – РИБТ, в зарубежной литературе она идет под названием TPI (Treponema pallidum immobilization test).

• Реакция иммунофлюоресценции — РИФ, в зарубежной литературе называется FTA (Fluorescent treponemal antibody). Она применяется в нескольких модификациях: РИФ-200 (FTA200); РИФ-абс (FTA-abs; FTA-abs double staining; FTA-abs IgM; РИФ-абс-IgM; 19S-IgM-FTA-abs).

• РИФц — реакция иммунофлюоресценции с цельной кровью.

• Иммуноферментный анализ — ИФА, за рубежом называется ELISA — Enzymelynked immunosorbent assay).

• Иммуноблотинг, в зарубежной литературе называется Western Blot.

• Реакция пассивной гемагглютинации — РПГА, в зарубежной литературе известна под названием TPHA (Treponema pallidum haemagglutination assay).

При появлении агглютинации эритроциты располагаются на поверхности лунки в виде «зонтика», а при отрицательном результате эритроциты свободно соскальзывают вниз и скапливаются на дне в центре лунки в виде «пуговки».

Оценка результатов РПГА проводится по общепринятой схеме:

• 4+ — положительная РПГА. Эритроциты в виде «зонтика» равномерно выстилают всю поверхность лунки;

• 3+ — положительная РПГА, при этом эритроциты выстилают всю поверхность лунки, но часть их «соскальзывает» к центру;

• 2+ — слабоположительная РПГА, эритроциты образуют плѐнку на небольшом участке;

• 1+ — отрицательная РПГА, эритроциты образуют рыхлый осадок на дне лунки;

• «-» — отрицательная РПГА, все эритроциты лежат на дне лунки в виде «пуговки» или колечка.