... > Микробиология > Культивирование вирусов. Культуры...

Культивирование вирусов. Культуры клеток. Индикация и идентификация вирусов в культуре клеток. Типы ЦПД. Вирусные включения

НАВИГАЦИЯ ПО СТРАНИЦЕ

Культивирование вирусов. Клеточные культуры Индикация и идентификация вирусов в культуре. ЦПД. Вирусные включения
ПОЛНЫЙ ОТВЕТ
БЕЗ ВОДЫ
Без воды — краткий вариант ответа,
легко понять и запомнить

Культивирование вирусов. Клеточные культуры

Вирусы могут культивироваться в культурах клеток, куриных эмбрионах и лабораторных животных. Эти методы являются длительными, трудоемкими и затратными, но в то же время считаются «золотым стандартом» диагностики. 

Культуры клеток, используемые для культивирования вирусов, разделяют на:

  1. первичные:

    • получают из ткани путем механического измельчения и обработки протеолитическими ферментами;

    • наиболее распространены культуры клеток почек обезьян, почек эмбриона человека, амниона человека;

    • срок жизни органичен (2-3 недели);

  2. полуперевиваемые:

    • срок жизни увеличен, способы выдерживать 50-100 пассажей;

    • наиболее распространены культуры фибробластов эмбриона человека;

  3. перевиваемые:

    • обладают потенциальным бессмертием;

    • большинство происходят из опухолевых клеток;

    • наиболее распространены культуры HeLa (карцинома шейки матки), Hep-2 (карцинома гортани), RH (почка человека).

Для культивирования клеток необходимы питательные среды, которые по своему назначению делятся на ростовые и поддерживающие. Ростовые среды обеспечивают активное размножение клеток для формирования монослоя, а поддерживающие – переживание клеток в уже сформированном монослое при размножении в клетке вирусов.

Для заражения используют культуры в пробирках с хорошо развитым монослоем клеток. Перед заражением клеток питательную среду удаляют и в каждую пробирку вносят взвесь материала, предварительно обработанного антибиотиками для уничтожения бактерий и грибов. 

После 30-60 мин. контакта вируса с клетками удаляют избыток материала, вносят в пробирку поддерживающую среду и оставляют в термостате до выявления признаков размножения вируса.

Индикация и идентификация вирусов в культуре. ЦПД. Вирусные включения

Индикация вирусов – это процесс установления наличия их в культуре без уточнения видовой принадлежности.

Для индикации используются следующие методы:

  • определение цитопатического действия (ЦПД), то есть характерного нарушения морфологии клеток, обнаруживаемого при микроскопии культур:

    • гигантские многоядерные клетки – симпласты (парамиксовирусы);

    • скопления набухших круглых клеток (аденовирусы);

    • крупнозернистая дегенерация (герпесвирусы);

    • дегенерация клеток с вакуолизацией (ретровирусы, флавивирусы);

    • отсутствие ЦПД (также может быть диагностическим признаком);

  • определение бляшкообразования:

    • бляшки – это участки монослоя, на которых клетки разрушены вирусом;

    • выглядят как зоны просветления;

    • могут подсчитываться для определения цитопатогенности вируса в бляшкообразующих единицах (БОЕ).

    • положительная реакция гемадсорбции;

    • положительная реакция интерференции (при отсутствии ЦПД);

  • цветная реакция:

    • в среду вносят индикатор pH, который при нормальной жизнедеятельности клеток изменяет окраску из-за накопления в среде различных метаболитов;

    • при заражении вирусом клеточный метаболизм резко снижается и окраска индикатора не изменяется;

  • образование в клетках вирусных включений:

    • представляют собой вирусные «фабрики» или скопления вирусных частиц;

    • цитоплазматические: тельца Негри (бешенство), тельца Гварниера и Пашена (натуральная оспа);

    • внутриядерные: тельца Каудри (простой герпес и ветряная оспа), Липшютца (ветряная оспа), «совиные глаза» (цитомегаловирусная инфекция).

Идентификация вирусов – это процесс надежного установления их видовой принадлежности. Она проводится при помощи серологических методов (РТГА, РТГАдс, РН, РСК, РНГА, ИФА, РИФ, РИА) и молекулярно-генетических методов (ПЦР, молекулярная гибридизация).

Zaka-zaka [CPS] RU + CIS

Полезные ссылки:

zaka-zaka

Покупай игры выгодно

РЕКЛАМА, ООО «ГЕЙБСТОР» ИНН: 7842136365

zaochnik

Срочная помощь в написании всех видов работ

РЕКЛАМА, ООО «ЗАОЧНИК.КОМ.» ИНН: 7710949967

skyeng

Лучшие из курсов английского в Skyeng

РЕКЛАМА, ОАНО ДПО «СКАЕНГ» ИНН: 9709022748