Культуральный (бактериологический) метод исследования: определение, цели, этапы, оценка
НАВИГАЦИЯ ПО СТРАНИЦЕ
легко понять и запомнить
Определение, цели и оценка бактериологического метода
Бактериологический метод исследования – это метод, основанный на выделении чистых культур бактерий с помощью культивирования на питательных средах и их идентификации до вида на основании изучения морфологических, культуральных, биохимических, генетических, серологических, биологических, экологических характеристик.
Цели бактериологического метода:
Постановка диагноза исходя из идентифицированного м/о.
Определение некоторых свойств м/о, например чувствительности к антибиотикам.
Определение количества м/о.
Внутривидовое различение м/о: определение варов – сероваров и др. для эпидемиологических целей (позволяет ответить на вопрос об общем источнике заражения).
Достоинства метода включают высокую чувствительность и специфичность, возможность определения количества и чувствительности м/о к антибиотикам, а также возможность раннего применения при заболевании. Недостатки включают длительность, трудоемкость, опасность инфицирования и высокую стоимость.
Обратите внимание: оценка достоинств и недостатков бактериологического и бактериоскопического методов прямо противоположна за исключением того, что в недостатках обоих числится опасность инфицирования.
Этапы бактериологического исследования
Схема бактериологического исследования для аэробов/факультативных анаэробов и облигатных анаэробов несколько отличается. Особенности, касающиеся облигатных анаэробов, выделены курсивом.
Первый этап:
Забор, транспортировка и хранение материала. Материал транспортируют с использованием специальных транспортных систем для анаэробов.
Посев в среду обогащения (при необходимости). Для анаэробов не производится.
Микроскопия с оценкой присутствующей микрофлоры, ее количества. В дальнейшем должны быть выделены такие же м/о, как в первичном мазке.
Предварительная обработка температурным или алкогольным шоком для выделения спорообразующих анаэробов.
Посев методом механического разобщения в чашку с общей, селективной или дифференциально-диагностической питательной средой. Для анаэробов основой для сред чаще всего служит кровяной агар.
Посев материала в жидкую тиогликолевую среду для определения летучих жирных кислот.
Второй этап:
Изучение морфологии колоний: оценка формы (правильная/неправильная), размера, поверхности (матовая/блестящая/складчатая), краев (ровные/волнистые/зубчатые), цвета (окрашенная/бесцветная), консистенции (вязкая/плотная), прозрачности. Колонии анаэробов дополнительно можно исследовать в УФ-свете для выявления флюоресценции.
Хроматография тиогликолевой среды и определение профиля жирных кислот.
Накопление чистой культуры: колонии всех морфотипов пересевают в отдельные пробирки. Изолированные колонии предполагаемых облигатных анаэробов пересеивают как в анаэробные, так и в аэробные условия, чтобы подтвердить их чувствительность к воздуху.
Третий этап:
Оценка чистоты культуры в мазке по Граму: клетки в мазке должны быть морфологически и тинкториально однородными.
Окончательная идентификация чистой культуры согласно критериям вида. Чаще всего исследуют биохимические и серологические признаки. Учитывается профиль жирных кислот.
Определение спектра чувствительности к антибиотикам.
Четвертый этап:
Учет и анализ результатов.
Выдача заключения на бланке.
Полезные ссылки:
