Культуральный (бактериологический) метод исследования: определение, цели, этапы, оценка

Определение, цели и оценка бактериологического метода

Цели бактериологического метода:

1. Постановка диагноза исходя из идентифицированного м/о.

2. Определение некоторых свойств м/о, например чувствительности к антибиотикам.

3. Определение количества м/о.

4. Внутривидовое различение м/о: определение варов – сероваров и др. для эпидемиологических целей (позволяет ответить на вопрос об общем источнике заражения).

Достоинства метода включают высокую чувствительность и специфичность, возможность определения количества и чувствительности м/о к антибиотикам, а также возможность раннего применения при заболевании. Недостатки включают длительность, трудоемкость, опасность инфицирования и высокую стоимость.

Этапы бактериологического исследования

Схема бактериологического исследования для аэробов/факультативных анаэробов и облигатных анаэробов несколько отличается. Особенности, касающиеся облигатных анаэробов, выделены курсивом.

Первый этап:

1. Забор, транспортировка и хранение материала. Материал транспортируют с использованием специальных транспортных систем для анаэробов.

2. Посев в среду обогащения (при необходимости). Для анаэробов не производится.

3. Микроскопия с оценкой присутствующей микрофлоры, ее количества. В дальнейшем должны быть выделены такие же м/о, как в первичном мазке.

4. Предварительная обработка температурным или алкогольным шоком для выделения спорообразующих анаэробов.

5. Посев методом механического разобщения в чашку с общей, селективной или дифференциально-диагностической питательной средой. Для анаэробов основой для сред чаще всего служит кровяной агар.

6. Посев материала в жидкую тиогликолевую среду для определения летучих жирных кислот.

Второй этап:

1. Изучение морфологии колоний: оценка формы (правильная/неправильная), размера, поверхности (матовая/блестящая/складчатая), краев (ровные/волнистые/зубчатые), цвета (окрашенная/бесцветная), консистенции (вязкая/плотная), прозрачности. Колонии анаэробов дополнительно можно исследовать в УФ-свете для выявления флюоресценции.

2. Хроматография тиогликолевой среды и определение профиля жирных кислот.

3. Накопление чистой культуры: колонии всех морфотипов пересевают в отдельные пробирки. Изолированные колонии предполагаемых облигатных анаэробов пересеивают как в анаэробные, так и в аэробные условия, чтобы подтвердить их чувствительность к воздуху.

Третий этап:

1. Оценка чистоты культуры в мазке по Граму: клетки в мазке должны быть морфологически и тинкториально однородными.

2. Окончательная идентификация чистой культуры согласно критериям вида. Чаще всего исследуют биохимические и серологические признаки. Учитывается профиль жирных кислот.

3. Определение спектра чувствительности к антибиотикам.

Четвертый этап:

1. Учет и анализ результатов.

2. Выдача заключения на бланке.