Метод окраски по Граму

Техника приготовления фиксированного мазка

Для приготовления мазка необходимо иметь:

• чистое обезжиренное предметное стекло;

• бактериологическую петлю;

• культуру, выращенную на плотной (агаре) или жидкой (бульоне) питательной среде;

• спиртовку;

• набор красок.

1. Обезжиренное предметное стекло и бактериологическую петлю прожигают в пламени горелки. Пробирку с изучаемой культурой держат между указательным и большим пальцами левой руки. Петлю берут правой рукой, мизинцем правой руки прижимают пробку пробирки к ладони.

   • Если мазок готовится с жидкой питательной среды, то каплю культуры наносят петлей на предметное стекло.

   • Если мазок делают из культуры с агара, то петлю с культурой вносят на предметное стекло и добавляют каплю физиологического раствора, в котором эмульгируют внесенный материал.

   • Петлю обжигают в пламени горелки. Мазок должен быть тонким, равномерно растертым, округлой формы, размером 1,5-2 см.

2. Высушивание мазка – производится при комнатной температуре.

3. Фиксация мазка производится с целью:

   • убить микробные клетки;

   • обеспечить лучшее прилипание микробов к предметному стеклу;

   • облегчить дальнейшее окрашивание.

   • Фиксация мазка в пламени горелки производится 3-кратно, действие пламени должно длиться 2 секунды.

4. Окраска препарата.

Окраска препарата по Граму

1. генцианвиолет через фильтровальную бумагу – 1-2 мин;

2. промывка;

3. раствор Люголя – 1-2 мин;

4. этиловый спирт – 30 сек;

5. промывка;

6. водный фуксин – 2-3 мин;

7. промывка и высушивание