Методы изучения фагоцитоза. Показатели фагоцитарной реакции, их определение и значение в клинической практике

Прямой метод изучения фагоцитоза. Показатели фагоцитарной реакции

В прямом методе микробы смешиваются с фагоцитами в пробирке или в организме лабораторных животных, через 15 и 120 минут из смеси приготавливаются микропрепараты на предметных стеклах и окрашиваются по Романовскому-Гимзе. Микроскопически подсчитывается число фагоцитирующих клеток и число фагоцитированных микробов. По ним производят расчет следующих показателей:

(Какой процент фагоцитов принимает участие в фагоцитозе?)

(Сколько микробов в среднем захватил один «работающий» фагоцит?)

(Какой процент фагоцитов завершили фагоцитоз через 2 часа?)

Непрямые методы изучения фагоцитоза

В непрямых методах изучается функциональная активность фагоцитов на различных стадиях фагоцитарной реакции. К таким методам относятся:

1. определение хемотаксической активности нейтрофилов:

   • разделение нейтрофилов и хемоаттрактанта (например, C5a) фильтром в камере Бойдена: хемоаттрактант помещается в нижний отсек, нейтрофилы – в верхний; спустя некоторое время подсчитывается число нейтрофилов на нижней стороне фильтра (то есть проникших сквозь него по градиенту концентрации хемоаттрактанта);

   • оценка клеточной миграции в агарозном геле: мигрирующие в сторону лунки с хемоаттрактантом фагоциты образуют характерный «клин»; интенсивность хемотаксиса оценивают по разности расстояний L1 и L2, где L2 – расстояние, пройденное в сторону лунки c гелем (контроль опыта);

2. определение адгезивных свойств фагоцитов производят при оценке их способности прикрепляться к пластику, стеклу, культуре эпителиальных клеток (в последнем случае клетки метят радиоактивным изотопом и после инкубации и промывки определяют уровень радиоактивности клеточной культуры);

3. определение переваривающей способности фагоцитов при помощи НСТ-теста (с нитросиним тетразолием), который окрашивается в синий цвет в присутствие активных форм кислорода, а также путем определения активности лизосомальных ферментов.