Методы выделения чистых культур аэробных, факультативно-анаэробных и облигатно-анаэробных бактерий

Выделение чистых культур аэробных и факультативно-анаэробных м/о

Методы механического разобщения:

1. посев бактериальной петлей, шпателем или пипеткой:

   • материал на петле расходуется постепенно;

   • по линиям, нанесенным в конце посева, вырастают изолированные колонии;

2. посев пластинчатыми разводками:

   • в чистые чашки Петри заливают материал в десятикратном разведении, затем заливают расплавленный агар и перемешивают;

   • используют при большом содержании бактерий в материале;

3. разобщение на основе подвижности:

   • материал засевают в конденсат на скосе мясопептонного агара;

   • подвижные бактерии «мигрируют» вверх по скосу;

4. разобщение на основе размеров:

   • смесь микроорганизмов фильтруют через микропористые фильтры;

   • используют для получения чистых культур вирусов и микоплазм.

Методы, основанные на избирательной чувствительности м/о к воздействию внешних факторов:

1. физических:

   • высокой температуры (например, выделение спорообразующих бактерий);

   • низкой температуры (выделение Y. pestis);

2. химических:

   • кислот (выделение возбудителей туберкулеза);

   • щелочей (выделение V. cholera);

   • солей (выделение стафилококка на ЖСА с 10-15% NaCl);

   • антбиотиков (выделение микоплазм на среде с пенициллином);

   • красителей (выделение микобактерий);

   • специфических ингибиторов (селенит натрия для выделения сальмонелл).

Метод заражения чувствительных лабораторных животных основан на явлении быстрого размножения микроорганизмов определенного вида в организмах определенных животных. Другие же виды м/о погибают под действием защитных факторов организма. Этим методом выделяют, например, пневмококк из организма белой мыши.

Выделение чистых культур облигатно-анаэробных м/о

Основными особенностями культивирования облигатных анаэробов являются использование специальных сред и специальных условий.

К питательным средам предъявляются следующие требования:

• соответствие сложным пищевым потребностям анаэробов (высокопитательные среды с витамином К, гемином);

• содержание стимулирующих добавок (бараньи эритроциты, глюкоза, L-аргинин и др);

• содержание селективных добавок (аминогликозидные антибиотики);

• низкий окислительно-восстановительный потенциал (добавление восстановителей).

Часто используемые среды: анаэробный кровяной агар с гентамицином или канамицином и ванкомицином, тиогликолевая полужидкая среда, железо-сульфитный агар.

Специальные условия культивирования подразумевают содержание кислорода в атмосфере не более 0,1%. Для их создания используют анаэробные камеры (50-200 чашек Петри), микроанаэростаты (10-12 чашек) или анаэробные пакеты (1-2 чашки). Анаэробную камеру заполняют анаэробной смесью газов, в остальных случаях кислород связывают химически при помощи водорода с образованием воды.