Определение микробной загрязненности лекарственных средств и способы устранения их антимикробного действия

Признаками микробной порчи жидких лекарственных форм является помутнение, если лекарственная форма должна быть прозрачной, появление осадка, увеличивающегося в объеме, образование пленки на поверхности, появление запаха, несвойственного данной лекарственной форме, изменение консистенции. Признаки порчи лекарственного сырья: изменение цвета, гниение, плесень.

Определение загрязненности стерильных ЛС

В зависимости от источников и путей попадания микроорганизмов в лекарственные средства возможны различные подходы к обеспечению требуемого уровня микробной чистоты нестерильных лекарственных средств:

• Если микробное обсеменение вызвано попаданием вместе с сырьём, то для достижения требуемого уровня микробной чистоты достаточно очистить от микроорганизмов сырьё;

• Если обсеменение микробами происходит в процессе изготовления, то проводят деконтаминацию готовой лекарственной формы.

Способы обеззараживания

• Предварительного обеззараживания можно достичь прессованием сыпучих материалов (при отсутствии споровых микроорганизмов, низкой влажности исходного порошка и высоком давлении;

• Термический способ. Широко распространённый метод промышленной деконтаминации. Не пригоден для обработки термолабильных лекарственных форм, для которых применяют прогревание до 60-70°С горячим воздухом, инфракрасное и высокочастотное излучение;

• Химический способ. Более пригоден для стерилизации светонепроницаемых веществ (бактерицидное действие реализуется лишь на глубине 1 мм). Наиболее часто его используют для обработки упаковочного материала и технологической воды;

• Возможна обработка УФ-лучами формообразующих веществ (крахмала, талька, сахара) в дисперсном состоянии (при перемешивании);

• Ионизирующее излучение. Наиболее перспективный способ деконтаминации, излучение обладает высокой проникающей способностью, не образуются канцерогенные, мутагенные, токсичные вещества, сохраняются физико-химические и биологические свойства обрабатываемых лекарств. Метод используют для обработки антибиотиков, витаминов, ферментов, гормонов и алкалоидов.

Методика санитарного и внутреннего контроля за микробной контаминацией нестерильных противомикробных препаратов

По ГФ, выпускаемые в ЛПО нестерильные лекарственные средства не должны содержать представителей семейства энтеробактерий, золотистых стафилококков и синегнойных бактерий в объёме 10 мл. 

1. Подготовка ЛС. Образец препарата готовят в форме раствора, суспензии или эмульсии. Твёрдые ГЛФ измельчают и разводят в стерильном фосфатном буфере, жидкие разбавляют стерильным фосфатным буфером, мягкие (мази, пасты, свечи, эмульсии и др.) готовят к испытанию по такой же методике как при испытании на стерильность.

2. Определение общего микробного числа. При титрационном методе основное разведение разводят в фосфатным буфером или 0,5% раствором хлорида натрия с 0,1% желатином. Основное (1:10) и дополнительное (1:100) →2 стерильные чашки → +20 мл расплавленного и остуженного до 48-50°С сахарного МПА → инкубируют при 30-35°С 48 часов → подсчет числа колоний и среднего числа колониеобразующих единиц (КОЕ) в 1 мл (г) цельного испытуемого препарата. Среднее число КОЕ в посеве основного разведения для кожных АБ и антисептиков - не больше 10, для пероральных — не больше 100, в дополнительном разведении — соответственно не больше 1 и 10. 

3. Испытание ГЛФ на общее содержание грибов проводят также способом прямого посева, но на плотную среду Сабуро, которую инкубируют 5 суток при 20-25°С. 

4. Определение присутствия в ГЛФ противомикробных препаратов энтеробактерий, стафилококков и синегнойных бактерий проводят способами прямого посева или мембранных фильтров. 10 г (мл) ЛС+ 100 мл среды обогащения (для энтеробактерий — бульон Хоттингера, для стафилококков и синегнойных — 5% солевой бульон) → инкубируют 48 часов при 30-35°С → пересев со среды Хоттингера на Эндо, из одной колбы солевого бульона — на ЖСА (на стафилококки), из другой колбы с солевым бульоном — на среду Кинг А (для выявления пигмента) → идентификация. При отсутствии в посевах 10 г образца препарата энтеробактерий, золотистых стафилококков и синегнойных бактерий делается вывод о пригодности препарата для использования в лечебных и профилактических целях. Метод прямого посева на среды может дать искажённые результаты в случаях, если разведение препарата в 10 раз недостаточно для исключения противомикробного действия препарата. В этих случаях необходимо параллельно ставить контроль на нейтрализацию с типовыми тест-штаммами кишечной палочки, золотистого стафилококка и синегнойных бактерий. Более надёжные результаты даёт испытание методом мембранных фильтров.