Принципы этиологической диагностики вирусных инфекций. Экспрессметоды. Серологический метод диагностики
НАВИГАЦИЯ ПО СТРАНИЦЕ
Методы диагностики вирусных инфекций. Экспресс-методы
При диагностике вирусных инфекций используются следующие методы: вирусологический, серологический, молекулярно-генетический, реже микроскопический и биологический. Лабораторные методы при диагностике вирусных инфекций направлены на:
выделение и идентификацию возбудителя («золотой стандарт»);
обнаружение антигенов в исследуемом материале;
обнаружение и определение титров противовирусных антител;
микроскопическое исследование препаратов исследуемого материала.
Под экспресс-методами понимают группу методов, позволяющих быстро и надежно (с высокой чувствительностью и специфичностью) обнаружить вирус или его антигены в исследуемом материале. По классификации большинство таких методов относятся к серологическим. При диагностике вирусных инфекций применяют:
реакция иммунофлюоресценции (РИФ);
иммунная электронная микроскопия (обработка препарата специфической противовирусной сывороткой и электрон-контрастным веществом, после чего при положительном результате при электронной микроскопии видны скопления вирусных частиц);
встречный иммуноэлектрофорез (образование линий преципитации в агаре между лунками с антителами и антигенами при проведении электрофореза);
реакция гемадсорбции на твердой основе;
ИФА с индикаторными полосками (лунками) для поиска антигенов;
иммуноблоттинг (ВИЧ);
ПЦР и гибридизация ДНК in situ (молекулярно-генетические методы).
Серологический метод диагностики
Серологические методы при диагностике вирусных инфекций применяются широко. Важно знать, что при исследовании антител почти во всех случаях исследуют парные сыворотки: первый образец забирают немедленно, а второй – через 10-14 дней. Диагностическим считается нарастание титра антител не менее, чем в четыре раза. Исследование именно парных сывороток позволяет убедиться, что обнаруженные антитела не имеют отношение к перенесенной в прошлом инфекции, а именно к этому случаю.
В связи с этим определение антител зачастую имеет ретроспективный характер, поскольку через две недели, которые занимает проведение исследования, его клиническое значение обычно минимальное (зачастую инфекция к этому времени уже разрешается). Однако при исследовании некоторых антител (ВИЧ, вирусы гепатитов) парные сыворотки применять необязательно.
К серологическим методам диагностики вирусных инфекций относятся следующие методы:
методы идентификации вируса:
реакция нейтрализации (РН) – неизвестный вирус смешивают с известными антисыворотками (по отдельности) и вносят в монослой клеток; при отрицательном результате (несовпадение сыворотки и вируса) клетки поражаются (А) и гибнут; при положительном результате (Б), то есть когда сыворотка подобрана верно, гибели клеток не наблюдается;
реакция нейтрализации
реакцию интерференции используют для вирусов, которые не оказывают видимого ЦПД (не убивают и не изменяют пораженные клетки); сперва ее проводят так же, как РН, а в конце к новой культуре добавляют еще и известный вирус с выраженным ЦПД; если ЦПД не проявилось, это означает, что известный вирус не смог поразить клетки, так как они уже были поражены исследуемым (неизвестным вирусом), то есть наблюдается явление интерференции; если же ЦПД в монослое проявилось, это означает, что известный вирус свободно поразил клетки, а исследуемый вирус был успешно нейтрализован антисывороткой, то есть примененная антисыворотка соответствует исследуемому вирусу;
прямая РИФ;
иммунная электронная микроскопия;
реакция торможения гемагглютинации (РТГА) применяется для вирусов, обладающих гемагглютинирующей активностью (гриппа, кори, краснухи и др.); культуру возбудителя смешивают с известной антисывороткой и эритроцитами; наличие гемагглютинации говорит о несоответствии сыворотки и возбудителя, а отсутствие (то есть торможение) гемагглютинации – о соответствии; в варианте реакции с торможением гемадсорбции (РТГАдс) эритроциты вносят в клеточную культуру и при несоответствии сыворотки наблюдают под малым увеличением микроскопа прилипание (адсорбцию) эритроцитов на клетках;
реакция торможения гемагглютинации
выявление антигенов:
ИФА;
РОНГА (редко);
выявление антител в крови:
ИФА;
РТГА;
реакция связывания комплемента (РСК);
непрямая РИФ;
радиоиммунный анализ (РИА).