Принципы этиологической диагностики вирусных инфекций. Экспрессметоды. Серологический метод диагностики

Методы диагностики вирусных инфекций. Экспресс-методы

При диагностике вирусных инфекций используются следующие методы: вирусологический, серологический, молекулярно-генетический, реже микроскопический и биологический. Лабораторные методы при диагностике вирусных инфекций направлены на:

• выделение и идентификацию возбудителя («золотой стандарт»);

• обнаружение антигенов в исследуемом материале;

• обнаружение и определение титров противовирусных антител;

• микроскопическое исследование препаратов исследуемого материала.

Под экспресс-методами понимают группу методов, позволяющих быстро и надежно (с высокой чувствительностью и специфичностью) обнаружить вирус или его антигены в исследуемом материале. По классификации большинство таких методов относятся к серологическим. При диагностике вирусных инфекций применяют:

• реакция иммунофлюоресценции (РИФ);

• иммунная электронная микроскопия (обработка препарата специфической противовирусной сывороткой и электрон-контрастным веществом, после чего при положительном результате при электронной микроскопии видны скопления вирусных частиц);

• встречный иммуноэлектрофорез (образование линий преципитации в агаре между лунками с антителами и антигенами при проведении электрофореза);

• реакция гемадсорбции на твердой основе;

• ИФА с индикаторными полосками (лунками) для поиска антигенов;

• иммуноблоттинг (ВИЧ);

• ПЦР и гибридизация ДНК in situ (молекулярно-генетические методы).

Серологический метод диагностики

Серологические методы при диагностике вирусных инфекций применяются широко. Важно знать, что при исследовании антител почти во всех случаях исследуют парные сыворотки: первый образец забирают немедленно, а второй – через 10-14 дней. Диагностическим считается нарастание титра антител не менее, чем в четыре раза. Исследование именно парных сывороток позволяет убедиться, что обнаруженные антитела не имеют отношение к перенесенной в прошлом инфекции, а именно к этому случаю.

В связи с этим определение антител зачастую имеет ретроспективный характер, поскольку через две недели, которые занимает проведение исследования, его клиническое значение обычно минимальное (зачастую инфекция к этому времени уже разрешается). Однако при исследовании некоторых антител (ВИЧ, вирусы гепатитов) парные сыворотки применять необязательно.

К серологическим методам диагностики вирусных инфекций относятся следующие методы:

1. методы идентификации вируса:

   • реакция нейтрализации (РН) – неизвестный вирус смешивают с известными антисыворотками (по отдельности) и вносят в монослой клеток; при отрицательном результате (несовпадение сыворотки и вируса) клетки поражаются (А) и гибнут; при положительном результате (Б), то есть когда сыворотка подобрана верно, гибели клеток не наблюдается; 

     

     реакция нейтрализации

   • реакцию интерференции используют для вирусов, которые не оказывают видимого ЦПД (не убивают и не изменяют пораженные клетки); сперва ее проводят так же, как РН, а в конце к новой культуре добавляют еще и известный вирус с выраженным ЦПД; если ЦПД не проявилось, это означает, что известный вирус не смог поразить клетки, так как они уже были поражены исследуемым (неизвестным вирусом), то есть наблюдается явление интерференции; если же ЦПД в монослое проявилось, это означает, что известный вирус свободно поразил клетки, а исследуемый вирус был успешно нейтрализован антисывороткой, то есть примененная антисыворотка соответствует исследуемому вирусу;

   • прямая РИФ;

   • иммунная электронная микроскопия;

   • реакция торможения гемагглютинации (РТГА) применяется для вирусов, обладающих гемагглютинирующей активностью (гриппа, кори, краснухи и др.); культуру возбудителя смешивают с известной антисывороткой и эритроцитами; наличие гемагглютинации говорит о несоответствии сыворотки и возбудителя, а отсутствие (то есть торможение) гемагглютинации – о соответствии; в варианте реакции с торможением гемадсорбции (РТГАдс) эритроциты вносят в клеточную культуру и при несоответствии сыворотки наблюдают под малым увеличением микроскопа прилипание (адсорбцию) эритроцитов на клетках;

     

     реакция торможения гемагглютинации

2. выявление антигенов:

   • ИФА;

   • РОНГА (редко); 

3. выявление антител в крови:

   • ИФА;

   • РТГА;

   • реакция связывания комплемента (РСК);

   • непрямая РИФ;

   • радиоиммунный анализ (РИА).