Реакции твёрдофазного анализа. Реакция иммунофлюоресценции. Радиоиммунный анализ. Иммунная электронная микроскопия

Реакции твердофазного анализа

Под реакциями твердофазного анализа понимают такие реакции, при которых известный (стандартизированный) компонент реакции (антиген или антитело) заранее в производственных условиях фиксируется в лунках планшета. При проведении таких исследований первый этап всегда состоит в помещении исследуемого материала в лунку.

Таким образом, реакции твердофазного анализа – это не отдельная группа серологических реакций, а наиболее современное исполнение таких методов, как ИФА, РИФ и РИА (все они подробно рассматриваются далее). Использование сорбированных на твердой фазе антигенов или антител позволяет повысить чувствительность метода и автоматизировать постановку реакции.

Реакция иммунофлюоресценции

Основными вариантами являются прямая РИФ (добавление меченых антител к искомому антигену с последующей отмывкой, рис. слева) и непрямая РИФ (добавление антител к искомому антигену, отмывка и последующее добавление меченых антител к иммуноглобулинам человека с окончательной отмывкой, рис. справа).

РИФ является одним из основных методов экспресс-диагностики инфекционных заболеваний, который позволяет проводить поиск антигена в любом биологическом материале. Он также используется в иммуногистохимии и онкогематологии.

Радиоиммунный анализ

Метод радиоиммунного анализа (РИА) заключается в добавлении к сорбированному на твердой фазе антигену сыворотки пациента и меченных радиоактивным изотопом диагностических антител.

Если в сыворотке пациента есть антитела к этому антигену, то они будут конкурировать с диагностическими антителами и снижать вероятность их связывания с антигенами.

В результате измеренная радиоактивность будет тем ниже, чем выше титр антител в сыворотке пациента. В отсутствие антител радиоактивность будет максимальной (все антигены связываются с радиоактивными диагностическими изотопами).

Описанная методика называется конкурентной. Кроме нее применяют также «сэндвич-метод», позволяющий производить поиск как антител, так и антигенов.

Радиоиммунный анализ является самым чувствительным из широко применяемых серологических методов, а также обладает высокой специфичностью. Его используют для диагностики многих вирусных и бактериальных инфекций, определении опухолевых маркеров и концентрации иммуноглобулинов. Основным недостатком метода является необходимость работы с радионуклидами.

Иммунная электронная микроскопия

Метод иммунной электронной микроскопии (ИЭМ) основывается на обработке препарата специфической антительной сывороткой, меченой электрон-контрастным веществом (например, ферритином), после чего при положительном результате при электронной микроскопии искомые антигены визуализируются благодаря контрастному веществу.

Ранее метод использовался для диагностики многих вирусов, однако в настоящее время утратил значение в этой области (поскольку разработаны более простые и дешевые методы). Применяется в научных целях и при исследовании неизвестных вирусов.