Реакция иммунопреципитации: ингредиенты, механизм, способы постановки, учёт, практическое применение
НАВИГАЦИЯ ПО СТРАНИЦЕ
легко понять и запомнить
Реакция иммунопреципитации: общие сведения
Реакция иммунопреципитации (преципитации, РП) очень схожа в своей сути с реакцией агглютинации. Ее результатом является образование видимого осадка (преципитата) или помутнения среды. Основное отличие заключается в том, что если в реакции агглютинации видимые частицы образуются с участием крупных нерастворимых антигенов, то в реакции преципитации в решетку включаются растворимые антигены (как правило, гаптены). Это значит, что склеиванию частиц должен предшествовать их переход в нерастворимую фазу.
Реакция преципитации также относится к простым реакциям, так как требует для постановки только АГ и АТ в том или ином виде. Она проводится несколькими способами, которые можно объединить в две группы: реакции в жидкой среде и реакции в геле (агаре). Независимо от выбранного способа постановки для этой реакции всегда соблюдается следующее правило: в процессе титрования разводят не сыворотку, а антиген. Реакционная среда обязательно должна содержать электролит (подходит физраствор) и иметь нейтральный pH.
РП является высокочувствительной и высокоспецифичной реакцией, превосходя по всем параметрам РА. Ее также отличает быстрота получения результата (в жидкой среде – в течение секунд).
Реакции иммунопреципитации в жидкой среде
Реакция кольцепреципитации проводится в специальных узких пробирках, в которые вносят сначала иммунную сыворотку, а затем сверху наслаивают (т.е. приливают очень аккуратно, не допуская перемешивания) раствор антигена. В случае положительной реакции на границе двух растворов образуется кольцо преципитации молочного цвета. Эта реакция используется для выявления АТ к бруцеллам в молоке.
Также широко распространена ее модификация – реакция термопреципитации по Асколи, при которой искомые антигены возбудителя сибирской язвы экстрагируют из различного материала (кожа, мясо, земля, испражнения) кипячением, а затем ставят, как описано выше.
Реакция флоккуляции проводится в пробирках со смешиванием растворов антител и антигенов (при избытке последних). В результате может образовываться хлопьевидный (лат. floccus – хлопья шерсти) осадок или помутнение. Обычно ее применяют для определения активности анатоксина или антитоксина.
Реакция микропреципитации используется для выявления низких титров АТ, которых недостаточно для образования видимого преципитата. Растворы антител и антигенов смешивают, после чего измеряют изменения оптической плотности смеси. В случае положительного результата (образование микропреципитатов) оптическая плотность повышается.
Реакции иммунопреципитации в геле
Двойная иммунодиффузия – в геле вырезаются лунки, в которые раздельно помещают антигены и иммунную сыворотку. И антигены, и антитела диффундируют в гель и при условии их гомологичности через сутки или более образуют иммунные комплексы, видимые в геле как линии преципитации.
В самом простом варианте этой реакции учитывают появлении линии преципитации между двумя лунками с растворами антигена и антитела. Его часто используют в тех случаях, когда производится поиск антигена в различных жидкостях и тканевых экстрактах.
Также эта реакция применяется для сравнения различных антигенов или сывороток. Например, используя не две, а три лунки, по характеру образуемых линий преципитации можно судить об идентичности антигенов. Возможны следующие результаты:
антигены полностью идентичны – линия преципитации единая, дугообразная;
антигены совершенно не совпадают – линии преципитации пересекаются крест-накрест;
антигены отличаются друг от друга, но в то же время имеют общие эпитопы – линия преципитации дугообразная, со стороны антигена, имеющего несовпадающие эпитопы, отходит «шпора».
Иммуноэлектрофорез – метод, объединяющий двойную иммунодиффузию и электрофорез. После внесения смеси антигенов в лунку геля их разделяют методом электрофореза: различные антигены перемещаются между катодом и анодом с разной скоростью. Сыворотку вносят не в лунку, а в канавку (поскольку антигены после электрофореза распределяются по всей длине пластинки геля). В течение нескольких суток происходит диффузия антигенов и антител в гель и образование линий преципитации.
Разновидностью этого метода является встречный иммуноэлектрофорез, при котором после внесения сыворотки антигены и антитела движутся навстречу друг другу не только в результате свободной диффузии, но и благодаря постоянному электрическому полю, наведенному на пластинку геля. В результате повышается чувствительность метода и его скорость (до нескольких часов).
Простая радиальная иммунодиффузия по Манчини.
Полезные ссылки:
