Серологический метод исследования. Общие закономерности серологических реакций. Использование серологических реакций для определения неинфекционных маркёров
НАВИГАЦИЯ ПО СТРАНИЦЕ
легко понять и запомнить
Серологический метод исследования: определение, задачи, материалы, оценка
Серологический метод исследования – это метод, в основе которого лежит реакция специфического взаимодействия антигенов (АГ) и антител (АТ). Для проведения исследования требуются либо известные антигены (поиск антител), либо известные антитела (поиск антигенов).
Задачи серологического метода:
диагностика инфекционных заболеваний по обнаружению антител:
обнаружение АТ в диагностическом титре;
оценка динамики титра АТ;
определение антител различных классов (IgG, IgM);
диагностика аутоиммунных и аллергических заболеваний по обнаружению антител;
диагностика инфекционных заболеваний (чаще при помощи РИФ или ИФА) и некоторых опухолей по обнаружению антигенов;
определение активности поствакцинального иммунитета;
определение групп крови и подбор доноров при пересадке органов;
определение титров приготовленных (диагностических, лечебных) сывороток.
Материалы для серологического исследования:
сыворотка крови, желательно венозной, взятой утром натощак;
чистые культуры микроорганизмов;
патологический материал от больных (соскобы, пунктаты, биоптаты, секционный материал) для экпресс-обнаружения антигенов.
Достоинства метода | Недостатки метода |
|---|---|
|
|
Основные понятия. Общие закономерности серологических реакций
Диагностическая сыворотка (известное АТ) – иммунная сыворотка, содержащая АТ известной специфичности в известном титре. Диагностические сыворотки получают путём иммунизации животных соответствующим АГ либо при помощи гибридомной технологии (моноклональные антитела).
Диагностикум (известный АГ) – взвесь известных микроорганизмов или извлечённых из них АГ в физрастворе.
Титр сыворотки – максимальное разведение сыворотки (или минимальное её количество), в котором обнаруживаются АТ.
Диагностический титр – разведение сыворотки, в котором реакция положительна только у больных и отрицательна у здоровых.
Парные сыворотки – две сыворотки одного обследуемого, взятые с определённым интервалом для изучения динамики титра АТ. Первую сыворотку берут немедленно, вторую – через 7–14 дней (острые инфекции) или через месяц (хроническая инфекция). Диагностическим считается нарастание титра антител в четыре и более раза.
Серонегативный период – стадия заболевания, в которой специфические АТ ещё не обнаруживаются, несмотря на наличие возбудителя («серологическое окно»).
Серопозитивный период – стадия заболевания, в которой специфические АТ обнаруживаются.
Сероконверсия – переход серонегативности в серопозитивность.
Общие закономерности серологических реакций:
Ставятся in vitro (за исключением некоторых реакций, включаемых также в аллергологический метод, например реакции кожной анафилаксии).
Проявляются при определенных условиях:
иммунологическое соответствие (гомологичность) АГ и АТ;
присутствие их в эквивалентных соотношениях (недостаток или избыток компонентов препятствует образованию иммунных комплексов);
в оптимальных температурных условиях (0–37 oС) и рН среды;
в присутствии электролита (0,85%-ный раствор NaCl).
Все серологические реакции отличаются по проявлениям (регистрируемому эффекту) и технике постановки.
Различают однофазные и двухфазные серологические реакции. Однофазные реакции имеют только специфическую фазу (например, реакция иммунофлюоресценции).
Двухфазные реакции завершаются неспецифической фазой, в которой происходят видимые изменения (например, реакция агглютинации или реакция преципитации).
Серологические реакции для определения неинфекционных маркёров
Для определения антител неинфекционной природы, которые чаще всего исследуют для выявления иммунологических процессов, связанных с групповой несовместимостью (система гистосовместимости, эритроцитарные системы АВ0, резус и др.), используют следующие реакции:
реакция агглютинации в коллоидной среде для определения неполных антител (например, резус-антител) – проводится как обычная реакция агглютинации, однако солевую среду (электролит) заменяют коллоидной (белок), поскольку неполные антитела полностью теряют свою активность в присутствии электролита;
реакция Кумбса для определения неполных антител – к исследуемой сыворотке, предположительно содержащей неполные (то есть имеющие только один активный центр) антирезусные антитела, добавляют эритроциты; неполные антитела способны связываться с эритроцитами, но не склеивать их (поскольку активный центр только один); при добавлении же антител против иммуноглобулинов человека они склеивают неполные антитела, а значит и эритроциты;
лимфоцитотоксический тест для типирования антигенов ГКГС – к сывороткам против разных антигенов ГКГС добавляют по 2000 исследуемых лимфоцитов, а затем комплемент, который разрушает лимфоциты, несущие антиген, против которого направлена сыворотка; затем добавляют краситель, окрашивающий только живые клетки, и подсчитывают число погибших лимфоцитов.
Полезные ссылки:
