Серологический метод исследования. Общие закономерности серологических реакций. Использование серологических реакций для определения неинфекционных маркёров

Серологический метод исследования: определение, задачи, материалы, оценка

Задачи серологического метода:

• диагностика инфекционных заболеваний по обнаружению антител:

  • обнаружение АТ в диагностическом титре;

  • оценка динамики титра АТ;

  • определение антител различных классов (IgG, IgM);

• диагностика аутоиммунных и аллергических заболеваний по обнаружению антител;

• диагностика инфекционных заболеваний (чаще при помощи РИФ или ИФА) и некоторых опухолей по обнаружению антигенов;

• определение активности поствакцинального иммунитета;

• определение групп крови и подбор доноров при пересадке органов;

• определение титров приготовленных (диагностических, лечебных) сывороток.

Материалы для серологического исследования:

1. сыворотка крови, желательно венозной, взятой утром натощак;

2. чистые культуры микроорганизмов;

3. патологический материал от больных (соскобы, пунктаты, биоптаты, секционный материал) для экпресс-обнаружения антигенов.

Основные понятия. Общие закономерности серологических реакций

Общие закономерности серологических реакций:

1. Ставятся in vitro (за исключением некоторых реакций, включаемых также в аллергологический метод, например реакции кожной анафилаксии).

2. Проявляются при определенных условиях:

   • иммунологическое соответствие (гомологичность) АГ и АТ;

   • присутствие их в эквивалентных соотношениях (недостаток или избыток компонентов препятствует образованию иммунных комплексов);

   • в оптимальных температурных условиях (0–37 oС) и рН среды;

   • в присутствии электролита (0,85%-ный раствор NaCl).

3. Все серологические реакции отличаются по проявлениям (регистрируемому эффекту) и технике постановки.

4. Различают однофазные и двухфазные серологические реакции. Однофазные реакции имеют только специфическую фазу (например, реакция иммунофлюоресценции).

Двухфазные реакции завершаются неспецифической фазой, в которой происходят видимые изменения (например, реакция агглютинации или реакция преципитации).

Серологические реакции для определения неинфекционных маркёров

Для определения антител неинфекционной природы, которые чаще всего исследуют для выявления иммунологических процессов, связанных с групповой несовместимостью (система гистосовместимости, эритроцитарные системы АВ0, резус и др.), используют следующие реакции:

1. реакция агглютинации в коллоидной среде для определения неполных антител (например, резус-антител) – проводится как обычная реакция агглютинации, однако солевую среду (электролит) заменяют коллоидной (белок), поскольку неполные антитела полностью теряют свою активность в присутствии электролита;

2. реакция Кумбса для определения неполных антител – к исследуемой сыворотке, предположительно содержащей неполные (то есть имеющие только один активный центр) антирезусные антитела, добавляют эритроциты; неполные антитела способны связываться с эритроцитами, но не склеивать их (поскольку активный центр только один); при добавлении же антител против иммуноглобулинов человека они склеивают неполные антитела, а значит и эритроциты;

   

3. лимфоцитотоксический тест для типирования антигенов ГКГС – к сывороткам против разных антигенов ГКГС добавляют по 2000 исследуемых лимфоцитов, а затем комплемент, который разрушает лимфоциты, несущие антиген, против которого направлена сыворотка; затем добавляют краситель, окрашивающий только живые клетки, и подсчитывают число погибших лимфоцитов.