В-лимфоциты, антигенспецифический В-клеточный рецептор. Методы определения количества и функциональной активности В-лимфоцитов

В-лимфоциты. В-клеточный рецептор

В-лимфоциты происходят из гемопоэтической стволовой клетки и в большинстве своем первоначально дифференцируются в костном мозге (у эмбриона также в печени). Название происходит от наименования фабрициевой сумки (Bursa), в которой у птиц происходит дозревание этих клеток.

Всего В-лимфоциты составляют примерно 15-20% от всех лимфоцитов и представлены двумя основными популяциями:

1. В2-лимфоциты («обычные»):

   • маркеры: В-клеточный рецептор, CD19+, CD20+, CD22+, CD5–;

   • составляют 80% от всех В-лимфоцитов;

   • дифференцируются в красном костном мозге (ККМ);

   • ежедневно образуется несколько миллиардов, однако в результате селекции до зрелых форм доходят только десятки миллионов;

   • в конечном счете дифференцируются в плазматические клетки;

   • входят в систему приобретенного иммунитета;

2. В1-лимфоциты:

   • маркеры: В-клеточный рецептор, CD19+, CD20+, CD22+, CD5+;

   • составляют 20% от всех В-лимфоцитов;

   • дифференцируются в серозных полостях (брюшной, плевральной);

   • самоподдерживающаяся популяция, не зависящая от ККМ;

   • локализуются в серозных полостях, миндалинах, сальнике;

   • синтезируют небольшой набор «нормальных» антител IgM и IgA к полисахаридам клеточной стенки бактерий, геамагглютиногенам (АВ0), некоторым аутоантигенам;

   • входят в систему врожденного иммунитета.

Первоначальная дифференцировка В2-лимцофитов в ККМ называется антигеннезависимой, поскольку не зависит от раздражения антигенами. Последующая дифференцировка в периферических органах иммунной системы после контакта с антигенами, в результате которой образуется функционально активная клетка, называется антигензависимой.

В процессе антиген-независимой дифференцировки наивный (т.е. не встречавшийся еще с антигеном) В-лимфоцит получает мембранный В-клеточный рецептор (ВКР), основу которого составляет иммуноглобулин класса M (зрелые и незрелые) или D (только зрелые). На поверхности одной клетки их число превышает 150 000.

Помимо IgM или IgD в структуру ВКР также входят 2 молекулы CD79, состоящие из Igα и Igβ.

Методы определения количества и функциональной активности В-лимфоцитов

Количество В-лимфоцитов оценивается следующими методами:

1. метод розеткообразования с эритроцитами мыши (М-розетки) – к суспензии клеток добавляют отмытые эритроциты мыши, после чего инкубируют, фиксируют и в мазке подсчитывают количество образовавшихся розеток – клеток, к которым присоединилось как минимум 3 эритроцита; в норме на 100 лимфоцитов в разных полях зрения должно быть 8-20 розеток (обычно подсчитывают на 200 лимфоцитов);

   

2. метод образования EAC-розеток – похож на предыдущий, однако вместо эритроцитов мыши используют комплексы ЕАС (Е –эритроцит, А – амбоцептор, нормальный гемолизин, С – комплемент C3), которые взаимодействуют с рецепторами к комплементу на поверхности лимфоцитов (преимущественно В-лимфоцитов);

   

3. проточная цитометрия (цитфлоуриметрия) – наиболее современный метод, в котором к цельной крови или суспензии клеток добавляются меченые флюорохромами антитела к CD-антигенам (в случае В-лимфоцитов – к CD19 и др.) и после инкубации и отмывки материал загружают в проточный цитфлоуриметр; в нем клетки одна за другой проходят через тонкую капиллярную трубку, где на них направлен лазерный луч; детекторы по боковому рассеянию света лазера определяют величину клеток, а по флюоресцентным вспышкам определенного цвета – наличие антигена, а значит и тип клеток; количество вспышек будет соответствовать количеству искомых клеток.

   

Функцию В-лимфоцитов оценивают по феномену антителообразования. В этих целях можно исследовать количество следующих антител:

1. «естественные антитела» (гемагглютинины группы крови, гетерофильные антитела против эритроцитов животных, антистрептолизин и др.);

2. антитела, образовавшиеся после иммунизации (обычно против дифтерии или столбняка, для оценки гуморального ответа на углеводные антигены – полисахаридными вакцинами против пневмококка или менингококка).

Определение количества антител проводят методами радиальной простой иммунодиффузии в геле по Манчини, иммунонефелометрии и ИФА.