Методы определения группы крови изогемагглютинирующими сыворотками, моноклональными антителами и стандартными эритроцитами, оценка результатов исследований

Определение групп крови системы AB0 при помощи стандартных изогемагглютинирующих сывороток

Заключение о групповой принадлежности делают на основании наличия или отсутствия антигенов А и В на эритроцитах. Для исследования используют стандартные изогемагглютипирующие сыворотки групп 0, А, В, АВ.

Стандартные изогемагглютинирующие сыворотки должны соответствовать следующим требованиям:

• сыворотка должна быть специфичной, то есть содержать определенные групповые АТ анти-А, анти-В или оба вместе, и не вызывать неспецифической агглюитинации эритроцитов одноименной группы и группы 0(I);

• должна быть активной, что выражается в наступлении первых признаков агглютинации со стандартными эритроцитами групп А1 и В в течение первых 30 секунд, со стандартными эритроцитами А2 в течение первой минуты и титром агглютининов по отношению к эритроцитам групп А1 и В не ниже, чем 1:32 и группы А2 — не ниже, чем 1:16;

• не должна оказывать на эритроциты гемолизирующего действия;

• должна быть прозрачной (допускается небольшая опалесценция, что не влияет на качество сыворотки);

• должна быть окрашена: группа А(II) — светло-зеленый или светло-синий цвет, В(III) — розовый или красный цвет, АВ (IV) — желтый цвет;

• должна быть предохранена от инфицирования прибавлением консервирующих средств.

Оснащение:

• стандартные изогемагглютинирующие сыворотки группы крови 0 (антиА, анти-В); группы крови А (анти-В); группы крови В (анти-А); группы крови АВ (без антител);

• раствор натрия хлорида 0,9%;

• пластинки со смачиваемой поверхностью;

• пипетки;

• стеклянные или пластмассовые палочки.

Порядок проведения исследования:

1. Промаркировать пластинку, для чего указать Ф.И.О. лица, у которого определяют группу крови, а также надписать специфичность изогемагглютинирующих сывороток в порядке их нанесения: 0 (антиА+В), А (анти-В), В (анти-А).

2. Нанести по одной большой капле (0,1 мл) стандартной сыворотки соответствующей группы. Для исследования используют по две серии сывороток каждой группы.

3. Рядом со стандартными сыворотками поместить маленькую каплю (0,01 мл) исследуемой крови.

4. Капли перемешать, наблюдать за ходом реакции, покачивая пластину.

5. Через 3 мин добавить каплю раствора натрия хлорида в лунки с агглютинацией.

6. Окончательная оценка проводится еще через 2 мин, то есть после 5 мин с момента начала манипуляции.

Трактовка результатов реакции

• Реакция агглютинации в каждой капле может быть положительной или отрицательной.

• При положительной реакции в смеси появляются видимые мелкие агтлютинаты, состоящие из эритроцитов, соединенных антителами. Мелкие агглютинаты постепенно сливаются в более крупные.

• При отрицательной реакции смесь остается равномерно окрашенной в красный цвет без присутствия агглютинатов.

• Исследование со стандартными сыворотками может дать четыре различных варианта:

  1. Агглютинация отсутствует с сыворотками всех трех групп крови, смесь осталась равномерно окрашенной. Это значит, что исследуемая кровь не содержит антигены А и В, т.е. принадлежит к группе крови 0.

  2. Агглютинация наступила с сыворотками групп 0 (анти-А+В) и А (анти-В) и не наступила с сывороткой В (анти-А). Это значит, что исследуемая кровь содержит антиген В и принадлежит к группе крови В.

  3. Агглютинация наступила с сыворотками групп 0 (анти-А+В) и В (анти-А) и не появилась с сывороткой А (анти-В). Это значит, что исследуемая кровь содержит антиген А и принадлежит к группе А.

  4. Агглютинация наступила с сыворотками трех групп. Это значит, что исследуемая кровь содержит антигены А и В и принадлежит к группе крови АВ.

• Для исключения неспецифической агглютинации исследуемых эритроцитов проводят дополнительное контрольное исследование с сывороткой АВ группы крови. Для чего необходимо нанести на пластинку большую каплю (0,1 мл) стандартной сыворотки АВ и добавить маленькую каплю исследуемой крови, перемешать и наблюдать за ходом реакции в течение 5 минут. Отсутствие агглютинации свидетельствует об отсутствии неспецифичности исследуемых эритроцитов, что позволяет отнести исследуемую кровь к группе крови АВ.

Определение группы крови с использованием цоликлонов (или моноклональных антител другого производителя)

Оснащение:

• цоликлоны анти-А, анти-В;

• раствор натрия хлорида 0,9%;

• пластинки со смачиваемой поверхностью;

• пипетки;

• стеклянные или пластмассовые палочки.

Порядок проведения исследования:

1. Отмаркировать секции на пластинке или планшете, указав Ф.И.О. исследуемого лица и специфичность реагента.

2. Нанести по одной большой капле (около 0,1 мл) каждого реагента: анти-А, анти-В.

3. Нанести по 1 маленькой капле (около 0,01 мл) исследуемой крови (эритроцитов) рядом с каждым реагентом.

4. Смешать отдельными чистыми стеклянными палочками каждую каплю крови (эритроцитов) с соответствующим реагентом.

5. Мягко покачивать пластинку. Несмотря на то, что при использовании стандартных реагентов четкая агглютинация наступает уже в первые секунды, результаты реакции учитывают через 3 минуты после окончания смешивания, чтобы не пропустить слабые варианты антигенов.

6. Записать результаты реакции немедленно после определения.

Интерпретация возможных результатов:

1. агглютинация отсутствует как с цоликлоном анти-А, так и с цоликлоном анти-В — исследуемая кровь принадлежит к группе 0 (I);

2. агглютинация наблюдается с цоликлоном анти-А и отсутствует с цоликлоном анти-В — кровь принадлежит к группе А (II);

3. агглютинация отсутствует с цоликлоном анти-А и наблюдается с цоликлоном анти-В — кровь принадлежит к группе В (III);

4. агглютинация наблюдается с цоликлоном анти-А и с цоликлоном анти-В — исследуемая кровь принадлежит к группе АВ (IV).

Определение групп крови при помощи стандартных эритроцитов

• Определение групп крови по стандартным эритроцитам производят на станции переливания крови. Принцип определения тот же, что и по стандартным сывороткам. Соотношение исследуемой сыворотки к стандартным эритроцитам — 10:1.

• Следует обратить внимание на оценку результата, которая будет отличаться от трактовки при использовании стандартных сывороток. Например, отсутствие агглютинации с эритроцитами 0 (I), А (II), В (III) будет свидетельствовать не о 0 (I) группе исследуемой крови, а о наличии АВ (IV) группы крови.