Способы определения резус-принадлежности. Возможные ошибки при определении группы крови

Исследование крови на резус-принадлежность необходимо производить в лаборатории. В экстренных случаях допустимо определение резус-фактора у постели больного экспресс-методом.

Способ определения резус-принадлежности крови с использованием моноклональных антител

• С этой целью применяют цоликлон анти-D.

• Одну большую каплю (0,1 мл) цоликлона наносят на планшет.

• Затем добавляют малую каплю крови (0,01 мл) и перемешивают.

• Результат оценивают через 3 мин.

• Наличие агглютинации позволяет сделать заключение, что исследуемая кровь является резус-положительной. При отсутствии агглютинации кровь квалифицируется как резус-отрицательная.

Недостатком данного метода является то, что IgM-антитела не вызывают агглютинации некоторых образцов эритроцитов со слабо выраженным D антигеном или с частичным D. Поэтому кровь, которая при исследовании моноклональным анти-D реагентом была определена как D-отрицательная, нуждается в дополнительном тестировании методом конглютинации с желатиной.

Метод конглютинации с желатиной

• На дно каждой пробирки наносят по 1 капле исследуемых эритроцитов, по 1 капле раствора желатины и по 1 капле сыворотки антирезус.

• Пробирки встряхивают и помещают в водяную баню при 46-48 °С на 10 мин.

• После извлечении пробирок из водяной бани в них доливают 5-10 мл физиологического раствора (до розового цвета).

• Пробирки переворачивают 2-3 раза с целью перемешивания содержимого и оценивают результат.

• При отсутствии агглютинации в пробирке видна равномерно окрашенная гомогенная жидкость, при ее наличии — опредляются хлопья. Если в пробирках имеется агглютинация, то эритроциты содержат соответствующие резус-антигены.

Основные причины ошибок

1. Недостаточная подготовленность рабочего места:

   • слабая освещенность;

   • неблагоприятный температурный режим (менее 15 °С или более 25 °С) — велика опасность выявления ложной агглютинации, обусловленной «холодовым» склеиванием эритроцитов или быстрым высыханием исследуемой капли с образованием монетных столбиков эритроцитов;

   • применение нестандартных пластин с низкой смачиваемой поверхностью;

   • недостаточное количество палочек, пипеток, реагентов.

2. Небрежность в выполнении работы:

   • отсутствие маркировки и нарушение порядка нанесения стандартных сывороток, эритроцитов, цоликлонов;

   • нанесение различных реагентов одной пипеткой или смешивание различных капель одной палочкой;

   • нарушение пропорции — реагент/кровь;

   • при определении АВО группы по стандартным сывороткам недобавление физиологического раствора в капли, где наступила агглютинация или добавление в лунки, где она еще не наступила, не проведение реакции со стандартной сывороткой группы АВ (IV).

3. Изменения активности или специфичности стандартных реагентов:

   • изготовителем не обеспечены необходимые параметры;

   • нарушение условий хранения реагентов (несоответствие температурного режима, нарушение герметичности, инфицирование);

   • использование реагентов с истекшим сроком годности.

Существуют еще варианты определения резус-фактора, однако сейчас они почти не используются:

1. с помощью реагента антирезус в пробирках с 33% раствором полиглюкина;

2. методом агглютинации в солевой среде с помощью сывороток, содержащих полные резус-антитела;

3. с помощью непрямого антиглобулинового теста.